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慢性馬兜鈴酸腎病大鼠模型腎組織中蛋白質組的差異表達
作者：孫世仁，陳光磊，寧曉暄,陳威【關鍵詞】 馬兜鈴酸；大鼠；腎組織；雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳；蛋白質組
Differentially expressed proteins in renal tissues of rat models of chronic aristolochic acid nephropathy
【Abstract】 AIM: To establish the 2dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D PAGE) profiles from aristolochic acid nephropathy (AAN) rat renal tissues and normal renal tissues and to identify the differentially expressed proteins. METHODS: Establish chronic renal interstitial fibrosis model in rats by peritoneal injection with aristolochic acid (AA). The total proteins from AAN models and normal rat renal tissues were separated by 2D PAGE. The differentially expressed proteins in 2DPAGE maps were analyzed using image analysis software. RESULTS: The rat models of AAinduced chronic renal interstitial fibrosis were established successfully. Clear, wellresolved and reproducible 2D PAGE patterns of AAN models and normal rat renal tissues were obtained and many differentially expressed proteins were found. CONCLUSION: The differentially expressed proteins of renal tissues can be induced by AA in Wistar rats. These proteins maybe mediate the toxicity of aristolochic acid to renal tissues.
【Keywords】 aristolochic acid; rats; renal tissues; 2D PAGE; proteome
【摘要】 目的： 制備慢性馬兜鈴酸腎病的大鼠模型，建立馬兜鈴酸腎病大鼠腎組織和正常大鼠腎組織的雙向電泳圖譜，從而展示差異表達的蛋白質，為進一步篩選介導馬兜鈴酸毒性作用的蛋白質分子奠定基礎. 方法：應用馬兜鈴酸腹腔注射制備大鼠慢性馬兜鈴酸腎病模型，提取其腎組織中總蛋白質，采用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術，對模型組和正常組腎組織中蛋白質進行差異展示. 結果：成功制備了慢性馬兜鈴酸腎病大鼠模型，并建立了模型組和正常組大鼠腎組織的雙向電泳圖譜，發現了差異蛋白質. 結論：馬兜鈴酸導致大鼠腎組織中蛋白質差異表達，這些差異表達的蛋白質可能介導了馬兜鈴酸的毒性作用.
【關鍵詞】 馬兜鈴酸；大鼠；腎組織；雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳；蛋白質組
【中圖號】 R587.1
0引言
自Vanhrweghem等［1］報道了因減肥藥引起“中草藥腎病（Chinese herbs nephropathy，CHN）”以來，含馬兜鈴酸成分的中草藥所致的腎損害馬兜鈴酸腎病（aristolochic acid nephropathy，AAN）越來越受到了國內外學者的廣泛重視. 由于一些常用中草藥及中成藥都含有馬兜鈴酸，因而由馬兜鈴酸引起的腎損害在臨床上十分常見［2］. 急性AAN主要表現為急性腎小管壞死，慢性AAN表現為寡細胞性腎間質纖維化［2-3］，病情多為不可逆性，而且即使停服藥物，其腎損害仍然繼續進展［4-5］. 絕大多數患者很快或逐漸進入終末期腎衰，需要腎臟替代治療. 因此闡明馬兜鈴酸腎損害的分子機制，以進行早期的診斷和治療（在蛋白質或基因水平進行干預和阻斷）將是緩解馬兜鈴酸腎損害的關鍵. 為此，我們建立慢性馬兜鈴酸腎病模型，用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳篩選和比較馬兜鈴酸誘導的差異蛋白質分子，為馬兜鈴酸導致腎損害的分子靶點研究奠定基礎.
1材料和方法
1.1材料雌性Wistar大鼠，20～24 wk齡，體質量190～210 g（第四軍醫大學實驗動物中心）；馬兜鈴酸制劑：用馬兜鈴酸標準品（中國生物制品研究所提供）配制成0.5 g/L的溶液,高壓滅菌, 置冰箱4℃下保存備用. 丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、SDS、三（羥甲基）氨基甲烷、苯甲基磺酰氟（華美生物工程公司）；超純尿素（上海生物工程公司產品）；兩性電解質pH 5～8（上海麗珠東風技術有限公司）；DYYⅢ26型雙向電泳槽和梯度混合器（北京六一廠）；電泳儀（BioRad公司）.
1.2方法
1.2.1慢性馬兜鈴酸腎病動物模型的建立根據文獻［6］進行，將Wistar大鼠隨機分為2組. 馬兜鈴酸組（n=30）：每只大鼠腹膜內注射馬兜鈴酸,劑量為5 mg/(kg
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