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CDC25B3基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 張齊 范健 石欣 孔波 肖志 楊正平 |
| 第1作者單位： | 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院普外科 江蘇南京 210009 |
| 論文摘要： | 目的 構(gòu)建CDC25B3基因RNAi慢病毒載體。方法 針對已經(jīng)篩選確定的CDC25B3基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的Oligo DNA，退火形成雙鏈DNA，與經(jīng)Hpa I 和Xho I酶切后的pGCL-GFP載體[含U6啟動子和綠色熒光蛋白(GFP)]連接產(chǎn)生LV-shCDC25B3慢病毒載體，PCR篩選陽性克隆，測序鑒定。用LV-shCDC25B3，pHelper 1.0和pHelper 2.0質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293T細(xì)胞，包裝產(chǎn)生慢病毒，以293T細(xì)胞GFP蛋白的表達(dá)水平測定病毒滴度。結(jié)果 PCR和測序證實(shí)，成功構(gòu)建CDC25B3shRNA的慢病毒載體LV-shCDC25B3。結(jié)論 成功構(gòu)建人CDC25B3基因RNAi慢病毒載體。 |
| 關(guān)鍵詞： | RNA干擾；CDC25B；胰腺癌；慢病毒 遠(yuǎn)程下載 論文(免費(fèi)PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2007年02月03日 |
| 同行評議： | 先進(jìn)性：CDC25B在腫瘤中已有不少研究，但在胰腺癌中研究較少，有1定的先進(jìn)性。CDC25B的RNAi已有文章報(bào)道（2004年），本文獨(dú)立設(shè)計(jì)構(gòu)建CDC25B3的RNAi亦可。 技術(shù)路線和結(jié)果：是較為成熟的技術(shù)路線，基本上沒有問題。但有1點(diǎn)存在1些疑問：在RNAi轉(zhuǎn)染對CDC25B蛋白表達(dá)抑制的效果時，采用與CDC25B載體共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞。這樣，CDC25B轉(zhuǎn)染的效率會影響效果的判斷，同時，CDC25B載體為CMV強(qiáng)啟動子PcDNA載體，會高表達(dá)轉(zhuǎn)染的CDC25B，但設(shè)計(jì)的RNAi仍能高效的抑制CDC25B。 在此步中，如采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CDC25B的293細(xì)胞，或者結(jié)構(gòu)性表達(dá)CDC25B的細(xì)胞為靶細(xì)胞，就不存在以上問題。 評論：本論文利用pGL－GFP載體構(gòu)建CDC25B基因RNAi慢病毒載體，經(jīng)篩選有效的RNAi靶序列后，成功載體連接、轉(zhuǎn)染和病毒包裝、產(chǎn)毒，經(jīng)酶切、PCR和測序鑒定構(gòu)建成功。設(shè)計(jì)合理，技術(shù)路線可行。構(gòu)建的載體可用于CDC25B基因功能研究，具有1定的實(shí)用性和先進(jìn)性。 |
| 綜合評價： | |
| 修改稿： | |
| 注：同行評議是由特聘的同行專家給出的評審意見，綜合評價是綜合專家對論文各要素的評議得出的數(shù)值，以1至5顆星顯示。 | |
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