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  • 探析不同品種葛根中葛根素及總黃酮的含量測(cè)定

    時(shí)間:2024-04-29 18:20:01 藥學(xué)畢業(yè)論文 我要投稿
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    探析不同品種葛根中葛根素及總黃酮的含量測(cè)定

    摘要:目的建立不同品種葛根中葛根素及總黃酮的含量測(cè)定方法。方法采用RP-HPLC法,以甲醇-水(32∶68)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm測(cè)葛根素含量;紫外分光光度法測(cè)柴葛、粉葛中總黃酮含量。結(jié)果葛根素峰分離度提高,峰形改善;葛根素0.204~2.04 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 9),回收率為98.7%(n=5),精密度RSD=0.86%。總黃酮濃度在4.08~16.32 μg/ml范圍內(nèi)與吸收度線性關(guān)系良好(r=0.999 8)。結(jié)論該法靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便易行,重復(fù)性好,可用于中藥葛根藥材及飲片的質(zhì)量控制。

    關(guān)鍵詞: 柴葛 粉葛 葛根素 總黃酮 高效液相色譜
     
      葛根為豆科植物柴葛Pueraria lobata (Willd. )Ohwi 和甘葛藤Pueraria thomsonii Bent h. 的干燥根,前者習(xí)稱柴葛,甘葛藤習(xí)稱“粉葛”[1],始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,味甘、辛,性平,具有增加腦及冠狀動(dòng)脈血流量、降低血管阻力、收縮平滑肌、降血糖及解熱等多種功效[2]。民間用于治療傷寒、溫?zé)犷^痛、煩熱消渴等癥,也是中醫(yī)常用的祛風(fēng)解毒藥。現(xiàn)代研究表明,葛根含葛根異黃酮,主要為葛根素(perarin) 、大豆苷(daidzin) 、大豆苷元(daidzein) 3種活性成分,其中葛根素是本屬的特征成分,也是主要成分,為了對(duì)葛根進(jìn)行有效的質(zhì)量控制,本實(shí)驗(yàn)以葛根素為指標(biāo),以柴葛、粉葛藥材為對(duì)象,建立了高效液相色譜法測(cè)定其葛根素的含量方法,并采用紫外分光光度法對(duì)其中的總黃酮進(jìn)行了含量測(cè)定,為柴葛、粉葛的藥材鑒定提供參考方法。
      1 儀器與材料
      1.1 儀器美國(guó) Waters 公司600-2487高效液相色譜儀,Millenium數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);Waters2487紫外檢測(cè)器;島津UV-2401PC型紫外分光光度計(jì);島津AY120型萬分之一電子分析天平;SB3200型超聲清洗器。
      1.2 材料葛根素對(duì)照品:中國(guó)藥品生物制品檢定所;甲醇為色譜純;水為重蒸餾超純水;其它試劑均為分析純。柴葛產(chǎn)于安徽岳西,粉葛產(chǎn)于廣西。
      2 方法與結(jié)果
      2.1 HPLC法測(cè)定葛根中葛根素的含量
      2.1.1 色譜條件色譜柱:Zorbax XDB-C18(4. 6 mm ×250 mm , 5 μm);流動(dòng)相∶甲醇-水(32∶68);流速1 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm;柱溫22℃;進(jìn)樣體積10μl。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算不低于5000。在該色譜條件下,樣品中的葛根素與其它峰均能達(dá)到基線分離,保留時(shí)間在14.3 min左右,對(duì)照品與樣品的色譜圖見圖1。
      圖1 對(duì)照品Ⅰ、柴葛索氏提取Ⅱ、粉葛索氏提取Ⅲ的HPLC色譜圖(略)
      2.1.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取葛根素對(duì)照品5.1mg,甲醇定容于25 ml量瓶。分別移取0.5,1.0,2.0,2.5 ml于5 ml量瓶,水定容,與原液共同作為HPLC用對(duì)照品溶液。
      2.1.3 供試品溶液的制備

      熱回流提取法:精密稱取柴葛、粉葛粉末(過50目篩)各0.1 g,置具塞錐形瓶中,精密加入30%乙醇50 ml,稱重。回流提取30 min,放冷,稱重并以30%乙醇補(bǔ)足減失重量,搖勻過濾,取續(xù)濾液為供試品,待測(cè)。

      索氏提取法:稱取柴葛、粉葛粉末各0.5 g, 精密稱定,以甲醇為提取劑提取4h,過濾,濃縮提取液并用甲醇定容于10 ml量瓶。超聲處理30min,取上清液以水定容于10 ml量瓶,待測(cè)。
     2.1.4 線性關(guān)系考察取對(duì)照品溶液,按照“2.1.1”色譜條件進(jìn)樣10 μl,葛根素進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo),以峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為:Y= 3.507 6×106X 3.274 5×104,r = 0.999 9。結(jié)果表明,葛根素進(jìn)樣量在0.204~2.04μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好,可用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。
      2.1.5 精密度考察在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下,吸取同一對(duì)照品溶液10 μl,連續(xù)進(jìn)樣5次,測(cè)得峰面積,RSD=0.8%,表明進(jìn)樣與峰面積積分的精密度良好。
      2.1.6 重復(fù)性考察取同一批柴葛、粉葛樣品5份,按“2.1.3”項(xiàng)下的方法制樣后,以“2.1.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣10 μl,測(cè)定葛根素的峰面積,按外標(biāo)法計(jì)算含量,RSD=2.8%,表明分析方法重復(fù)性良好。
      2.1.7 穩(wěn)定性考察精密吸取對(duì)照品溶液10 μl,分別在0,1,2,4,8,12,24,48 h時(shí)進(jìn)樣,在 “2.1.1”項(xiàng)下色譜條件下測(cè)定峰面積,其RSD值為1.4%。表明葛根素在室內(nèi)正常條件下48 h內(nèi)穩(wěn)定,因此整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程可以在常溫不避光的條件下操作。
      2.1.8 回收率考察精密稱取已知葛根素含量的同一樣品藥材粉末5份,20 mg/份,精密稱定后,每份加入濃度為0.204 mg/ml的對(duì)照品溶液2.5~3.3 ml,按“供試品溶液制備”項(xiàng)下操作,精密吸取10 μl,進(jìn)樣,計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

      表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果(略)
      2.1.9 樣品測(cè)定按“供試品溶液制備”項(xiàng)下操作,制備各樣品溶液,精密吸取10μl,進(jìn)樣,在所選色譜條件下測(cè)定,外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量,結(jié)果見表2。
      表2 樣品中葛根素測(cè)定結(jié)果(略)
      2.2 紫外分光光度法測(cè)定葛根中總黃酮含量
      2.2.1 線性關(guān)系考察精密稱取葛根素對(duì)照品5.1 mg,甲醇定容于25 ml量瓶。移取0.2,0.4,0.5,0.6,0.8 ml置于10 ml量瓶,水定容,為紫外測(cè)總黃酮用對(duì)照品溶液。

      以溶液濃度為橫坐標(biāo),吸收度為縱坐標(biāo),得線性方程:Y = 0.078X 0.015 2,r=0.999 8。表明總黃酮濃度在4.08~16.32 μg/ml范圍時(shí)與吸收度線性關(guān)系良好。
      圖2 葛根素峰光譜掃描圖譜(略)
      2.2.2 供試品制備

      方法1:分別稱取柴葛、粉葛4.5 g,置于圓底燒瓶,乙醇回流提取3次,40 ml/次,時(shí)間均為1 h。合并3次濾液并濃縮置25 ml量瓶,乙醇定容。取1 ml用乙醇定容于100量瓶,再取1 ml上清液于10 ml量瓶,水定容,待測(cè)。以1 ml乙醇加水定容于10 ml量瓶中為空白對(duì)照。

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