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HPLC法測定益氣溫陽膠囊中阿魏酸的含量
【關(guān)鍵詞】 益氣溫陽膠囊
摘要:目的 建立HPLC測定益氣溫陽膠囊中的有效成分其他阿魏酸含量的方法。 方法 采用色譜柱為C18柱，流動相：甲醇水冰醋酸(體積比25∶75∶0.35)，檢測波長為320 nm。結(jié)果 阿魏酸在0.02~0.20 μg范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系，膠囊中阿魏酸的平均回收率為98.8%，RSD=0.97%。結(jié)論 方法簡便、穩(wěn)定，能有效地控制該制劑的質(zhì)量。
關(guān)鍵詞:益氣溫陽膠囊;高效液相色譜法;阿魏酸
Abstract: Objective To establish a method for the determination of ferulic acid in Yiqiwenyang capsules. Method Samples were extracted with ethyl acetate, and separated on a C18 column(5μm， 250 mm×4.6 mm) using methanol-wateracetic acid (25∶75∶035) as mobile phase. The detection wavelength was set at 320 nm. Results The calibration curve of ferulic acid was linear in the range of 0.02~0.20 μg. The average recovery was 98.8% with RSD 0.97% (n=5). Conclusions The method could be used for the quality control of Yiqiwenyang capsules.
Key words:Yiqiwenyang capsules; HPLC; ferulic acid
益氣溫陽膠囊系由黃芪、硫磺、當(dāng)歸、川芎等十三味藥材加工提取制得的制劑，具有溫陽益氣，活血通絡(luò)的功效。由于現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有建立含量測定方法，不利于制劑的質(zhì)量控制。通過處方分析，我們選擇了測定方中臣藥當(dāng)歸、川芎的有效成分阿魏酸作為質(zhì)量控制的指標(biāo)。據(jù)文獻(xiàn)報道，阿魏酸具有明顯擴(kuò)張冠狀動脈血管、增加冠脈流量、抑制ADP誘導(dǎo)的血小板凝聚、增強(qiáng)細(xì)胞吞噬功能的作用[1]。本文采用HPLC法測定了阿魏酸的含量，為控制該產(chǎn)品的質(zhì)量提供了依據(jù)。
1 儀器與試藥
SHIMADZU SPD-10A型高效液相色譜儀;HW-2000工作站。阿魏酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(0773-9910);實驗用水為重蒸餾水;甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純;益氣溫陽膠囊(廣州市花城制藥廠提供，批號20020501、20020803、20020902)。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱為Hypersil BDS C18 柱(5 μm， 250 mm×4.6 mm)，流動相為甲醇水冰醋酸( 25∶75∶0.35)，流速：1.0 mL/min，檢測波長為320 nm;柱溫為室溫。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液的制備
取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇配制成每1 mL含阿魏酸0.01 mg的溶液，即得。
2.2.2 供試品溶液的制備
取本品30粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，取6 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50 mL，水浴中避光加熱回流至浸出溶液無色，放冷，取出，水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至20 mL棕色瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.3 系統(tǒng)適用性試驗[2]
2.3.1 陰性對照液的制備
按處方量稱取不含當(dāng)歸、川芎的各味藥材，按工藝制成制劑,再按供試品溶液制備方法配制陰性對照液。
2.3.2 系統(tǒng)適用性
在上述色譜條件下，分別取阿魏酸對照品溶液、供試品溶液和陰性對照液各10 μL測定，供試品阿魏酸與相鄰雜質(zhì)分離度大于1.5，陰性對照液在與阿魏酸對照品相同保留時間處未見色譜峰，認(rèn)為不干擾測定。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于3000。見圖1。
2. 4 線性關(guān)系考察
精密吸取對照品溶液(0.01 mg/mL)2.0、5.0、100、15.0、20.0 μL，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)，阿魏酸量(m)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，峰面積與阿魏酸量呈良好線性關(guān)系，回歸方程為A=4595350m+2129.27，r=0.9998，阿魏酸量在0.02～0.20 μg范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系。
2.5 精密度試驗
精密吸取同一對照品溶液(0.01 mg/mL)，依法連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，峰面積結(jié)果分別為466820、473352、467155、463808、471712、472915，平均值為469294，其RSD為0.83%。
2.6 穩(wěn)定性試驗
取同一批樣品(批號：20020902 )避光放置，在0、1、2、3、6、12 h分別進(jìn)樣10 μL，依法測定含量，結(jié)果RSD為1.12%，表明供試品在避光放置條件下12 h內(nèi)較穩(wěn)定。
2.7 回收率試驗
采用加樣回收法，精密稱取已知含量的益氣溫陽膠囊，分別加入一定量的阿魏酸對照品溶液(0.01 mg/mL)，按樣品測定方法測定含量，結(jié)果見表1。表1 阿魏酸回收率測定結(jié)果(略)
2.8 樣品含量測定
取對照品溶液(0.01 mg/mL)和供試品溶液，用045 μm微孔濾膜過濾,各進(jìn)樣10 μL，讀取峰面積,按外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表2。表2 3批益氣溫陽膠囊阿魏酸含量(略)
3 討論
3.1 有關(guān)制劑中阿魏酸的高效液相測定方法已有多篇文獻(xiàn)[3-4] 報道。曾參照文獻(xiàn)[4]的方法，采用甲醇冰酸酸(體積比45∶55) 為流動相，結(jié)果供試品中阿魏酸與相鄰雜質(zhì)分離度小于1.5。本文將流動相組成調(diào)整為甲醇水冰醋酸(體積比25∶75∶0.35)，供試品中阿魏酸與相鄰雜質(zhì)分離度大于1.5，阿魏酸峰峰形較好。
3.2 阿魏酸對光不穩(wěn)定，配成溶液后及樣品的制備過程中注意避光，否則會引起阿魏酸的含量降低。
3.3 用高效液相色譜法測定阿魏酸的含量，使用簡單的體系就達(dá)到分離測定的目的，方法穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為本品的質(zhì)量控制方法。
參考文獻(xiàn):
[1]鄭虎占. 中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用(第一卷)[M].北京：學(xué)苑出版社，1997：910.
[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].化學(xué)工業(yè)出版社，2000：附錄38-40.
[3]王寶.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1994： 439.
[4]劉義梅.HPLC法測定復(fù)方銀杏口服液中阿魏酸的含量[J].中藥材，2005，28(2)：147.
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