- 相關(guān)推薦
檢驗技師考點：軟瓊脂培養(yǎng)法克隆
(1)軟瓊脂的配制：含有20%NCS(小牛血清)的2倍濃縮的RPMI1640.
①1%瓊脂水溶液：高壓滅菌，42℃預(yù)熱。
②0.5%瓊脂：由1份1%瓊脂加1份含20%小牛血清的2倍濃縮的RPMI1640配制而成。置42℃保溫。
(2)用上述0.5%瓊脂液(含有飼養(yǎng)細(xì)胞)15ml傾注于直徑為9cm的平皿中，在室溫中待凝固后作為基底層備用。
(3)按100/ml，500/ml或5000/ml等濃度配制需克隆的細(xì)胞懸液。
(4)1ml 0.5%瓊脂液(42℃預(yù)熱)在室溫中分別與1ml不同濃度的細(xì)胞懸液相混合。
(5)混勻后立傾注于瓊脂基底層上，在室溫中10min，使其凝固，孵育于37℃、5%CO2孵箱中。
(6)4～5天 后即可見針尖大小白色克隆，7～10天后，直接移種至含飼養(yǎng)細(xì)胞的24孔中進(jìn)行培養(yǎng)。
(7)檢測抗體，擴(kuò)大培養(yǎng)，必要是地再克隆化。
【檢驗技師考點：軟瓊脂培養(yǎng)法克隆】相關(guān)文章：
檢驗技師考點：單克隆抗體的優(yōu)點01-15
檢驗技師考點：單克隆抗體的制備原理01-15
檢驗技師考點：單克隆抗體制備01-15
檢驗技師考點：純化抗體01-15
檢驗技師考點：IgG純化01-15
檢驗技師考點：抗凝劑肝素01-15
檢驗技師考點：抗原稀釋12-16
檢驗技師考點：膀胱粘膜白斑01-15
檢驗技師考點：胱氨酸尿01-15